文章信息
文章名稱：Neddylation of Coro1a determines the fate of multivesicular bodies and biogenesis of extracellular vesicles.
發表期刊：J Extracell Vesicles. 2021 Oct;10(12):e12153.
影響因子 (IF) ：25.841本文應用 Bioss 產品：
Rabbit anti-Rab7 Cat: bs-6703R
文中檢測種屬: Human；應用: Cryo-EM
圖片來自原文FIGURE 6. (e)
Rabbit anti-UBE2F Cat: bs-8378R
文中檢測種屬: Human，Mouse；應用: WB
圖片來自原文FIGURE 4.(a)
研究背景
胞外囊泡 (EVs) 根據其大小和來源主要分為兩類：微囊泡和外泌體。微囊泡是從質膜向外出芽脫落，形成直徑在 50nm ~ 1μm 之間的微囊泡、微粒和大囊泡。外泌體是由內體途徑產生的直徑在 30nm ~ 150nm的小的囊泡，作為細胞之間獨特的傳遞載體，參與多種疾病的過程，包括發育，免疫，組織穩態，腫瘤和神經退行性疾病等。因此，深入探究以外泌體為代表的胞外囊泡的生物發生的調控機制是治療這些疾病的潛在策略，同時也對于其作為診斷標記物和治療性藥物載體有著重要的臨床意義。在 EV 的亞群外泌體的生物合成過程中，多囊泡體 (MVBs) 或者與溶酶體融合而降解，或者與質膜融合釋放管腔內囊泡形成外泌體，MVBs 的命運直接決定了外泌體的生物發生。然而，MVBs 如何靶向至溶酶體以及質膜融合的機制仍有待深入研究。蛋白質的翻譯后修飾在 EV 的生物發生中起重要的調節作用。Neddylation 作為類泛素化修飾的一種，尚無明確的研究證實其是否可以參與調節 EV 的生物發生。
研究原理
為探究Neddylation是否參與調節 EV 的生物發生，首先我們使用Neddylation 特異性抑制劑 MLN4924 探究 Neddylation 對EV 分泌的影響。接著，我們從調節 EV 生成的三個方面：MVBs 的早期形成、MVBs 靶向溶酶體降解、MVBs 與質膜的融合分別探究 Neddylation 在調控 EV 分泌中的作用，最終證實 Neddylation 通過靶向 MVBs 至溶酶體降解來抑制 EV 的生成。我們進而通過質譜分析找到在調控 EV 分泌過程中 Neddylation 修飾的底物蛋白 Coro1a，并證實了 Coro1a 在生理條件下可以發生 Neddylation 修飾，以及Coro1a 是 Neddylation 調控 EV 分泌過程所依賴的。隨后我們明確了 Coro1a 發生 Neddylation 修飾的機制和主要修飾位點。之后，我們進一步探討 Neddylation 修飾的 Coro1a 在 EV 生成中的作用以及其是否可以用作調節 EV 分泌的靶標，從而提示我們通過 Coro1a 介導的EV分泌調節來調控腫瘤的發展。
研究結果
我們首先發現 Neddylation 通過促進 MVBs 的靶向溶酶體降解從而抑制 EV 的分泌。進而，我們鑒定出 Neddylation 的新底物 Coro1a，以及與 Coro1a 的 Neddylation 修飾過程中相關的 E2 結合酶 UBE2F 和 E3 連接酶 TRIM4。在 TRIM4 的催化下，NEDD8 主要與 Coro1a 的第 233 位賴氨酸殘基結合形成共價鍵。而后， Neddylation 修飾的 Coro1a (NEDD8-Coro1a) 與 Rab7 直接相互作用并將 Rab7 招募至 MVBs，從而促進 MVBs 的溶酶體降解，進而導致 MVBs 與質膜的融合減少和 EV 分泌降低。此外，通過體內腫瘤模型，我們證實 Coro1a 是通過減少 EV 分泌來抑制腫瘤進展的有效靶標。
研究結論
我們的研究證實，Neddylation 在 EV 的生物發生中起著負調作用。同時，我們鑒定出 Neddylation 的新底物 Coro1a，明確了 Neddylation 修飾 Coro1a 招募 Rab7 促使 MVBs 靶向溶酶體融合從而調控EV的生成，從而揭示了調節 EV 生物發生的新機制，為調控 EV 生成和腫瘤治療提供新的靶點。
文章內使用的抗體—Bioss相關推薦
二抗|
英文名稱 |
裸抗貨號 |
文獻數量 |
標記二抗 |
|
Goat Anti-Rabbit IgG H&L |
90 |
||
|
Goat Anti-Mouse IgG H&L |
44 |
||
|
Donkey Anti-Rabbit IgG H&L |
3 |
|
產品名稱 |
貨號 |
交叉反應 |
應用 |
PubMed |
|
Rabbit anti-Rab7 (Cryo-EM) |
Mo Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
5 |
|
|
Rabbit anti-UBE2F |
- |
- |
- |
|
|
beta-Actin (Loading Control) |
Mo Hu Rt |
WB, IHC, FC, ICC |
769 |
|
|
beta-Actin (Loading Control) |
Hu |
WB |
55 |
|
|
Ki-67 |
Hu |
FC |
- |
|
|
Ki-67 |
Mo Hu |
IHC, FC, IF, ICC |
62 |
|
|
Ki-67 |
Hu |
IHC, FC, IF, ICC |
- |
|
|
Ki-67 |
Mo Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
3 |
|
|
Ki-67 |
Mo Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
15 |
|
|
Ki-67 |
Mo Hu |
IHC, FC, IF, ICC |
2 |
|
|
Ki-67 |
Hu |
IHC, FC, IF, ICC |
3 |
|
|
Ki-67 |
Hu Rt |
IHC, IF, ICC |
5 |
|
|
Ki-67 |
Hu |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
CD8 |
Mo Hu |
WB, IHC, IF, ICC |
50 |
|
|
CD8 |
Mo Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
2 |
|
|
CD8 |
Hu |
WB |
- |
|
|
CD8 |
Rt |
WB |
- |
|
|
CD8 |
Mo |
WB |
- |
|
|
CD8 |
Mo |
WB |
- |
|
|
CD8 |
Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
3 |
|
|
CD8 alpha |
Rt |
WB |
4 |
|
|
C-Myc |
Hu |
WB |
- |
|
|
C-Myc |
Hu |
IHC, IF, ICC |
17 |
|
|
c-MYC |
Hu |
WB |
- |
|
|
Myc tag |
Hu |
WB, IHC, IF, ICC |
1 |
|
|
Myc tag |
Fusion Protein |
WB |
- |
|
|
Myc tag |
Recombinant protein |
WB |
- |
|
|
n-Myc |
Mo |
WB |
- |
|
|
n-Myc |
Hu |
IHC, IF, ICC |
3 |
|
|
CD45 |
Hu Rabbit |
FC |
14 |
|
|
CD45 |
Mo Rt |
FC |
- |
|
|
CD45 |
Rt |
FC |
- |
|
|
CD45 |
Hu Rt |
WB, FC |
6 |
|
|
CD45 |
Hu |
FC |
1 |
|
|
CD45 |
Hu |
FC |
- |
|
|
CD45 |
Hu |
FC |
- |
|
|
CD45 |
Hu |
WB |
- |
|
|
His tag |
Recombinant protein |
WB |
14 |
|
|
His Tag |
Recombinant protein |
WB |
- |
|
|
His tag |
Recombinant protein |
WB |
- |
|
|
LAMP1 |
Hu Rt |
IHC, FC, IF, ICC |
11 |
|
|
CD9 |
Mo |
WB |
- |
|
|
CD9 |
Mo |
IHC, IF, ICC |
1 |
|
|
CD9 |
Mo Hu Rt |
WB, FC |
9 |
|
|
CD9 |
Mo Hu |
WB, IHC, IF, ICC |
- |
|
|
CD63 |
Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
8 |
|
|
CD63 |
Mo |
IHC, IF, ICC |
1 |
|
|
TSG101 |
Hu Rt |
WB, IHC, IF, ICC |
6 |
|
|
TSG101 |
Hu |
WB |
- |
|
|
TSG101 |
Mo Hu Rt |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
CD81 |
Mo Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
6 |
|
|
CD16 |
Mo Hu Rt |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
5 |
|
|
CD16 |
Mo |
WB |
- |
|
|
CD32 |
Hu |
WB, FC |
- |
|
|
CD32 |
Hu |
WB |
1 |
|
|
PD-1 |
Mo Hu Rt |
WB, FC |
5 |
|
|
Granzyme A |
Mo |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
Granzyme B |
Hu |
IHC, FC, IF, ICC |
3 |
|
|
Granzyme K |
Mo |
WB |
- |
|
|
Annexin A1 |
Hu Rt |
WB, IHC, IF, ICC |
2 |
|
|
TIM 3 |
Mo Rt |
WB, IHC, IF, ICC |
2 |
|
|
Ubiquitin |
Mo Hu Rt |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
1 |
|
|
Ubiquitin |
Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
1 |
|
|
Ubiquitin |
Mo |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
Ubiquitin |
Mo Hu Rt |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
Ubiquitin |
Mo |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
Cullin 1 |
Hu |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
Cullin 3 |
Hu |
WB |
1 |
|
|
CORO2B |
Mo Hu |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
CORO6 |
Mo |
WB |
- |
|
|
CORO7 |
Hu |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
Coronin 3 |
Mo |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
ALIX |
Mo Hu Rt |
WB, IHC, IF, ICC |
1 |
|
|
Flag Tag |
Recombinant protein |
WB |
1 |
|
|
Flag Tag |
Recombinant protein |
WB |
- |
|
|
HA tag |
Recombinant protein |
WB |
- |
|
|
EEA1 |
Hu |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
HGS |
Rt |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
GM130 |
Rt |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
MON1A |
Hu |
WB |
- |
|
|
MON1B/HSRG1 |
Mo |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
RAB7 |
Mo Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
- |
產品信息以官網為準
